【產品名稱】CIK細胞高效擴增試劑盒套裝

【產品組成】套裝貨號：662070

套裝內容	數量	單位	保存條件	產品性狀
CIK Cell Culture Medium（662071）	2	瓶	2-8℃	液體
CIK-A（662072）	1	支	-20℃	液體
CIK-B（662073）	1	支	-20℃	液體
CIK-C（662074）	1	支	-20℃	凍干粉
CIK-D（662075）	1	支	-20℃	凍干粉

【產品介紹】
? ? ? 本產品是一款 CIK 細胞高效擴增的試劑盒。外周血/臍帶血中的 PBMC 細胞經本試劑盒處理后， 在 14-16 天時間內，細胞總數可達到6×10⁹- 8×10⁹，細胞存活率95%以上，擴增倍數在500-1000 倍，CIK 細胞比例最高可達90%以上。
? ? ? 本試劑盒適用于人外周血/臍帶血和經過血細胞單采儀處理獲得的白細胞等來源的樣品。
? ? ? 本試劑盒是在符合相關規范的無菌環境中生產，并已通過了嚴格的細菌、真菌、支原體、病毒（HIV、HAV、HBV、HCV）、內毒素檢測。本試劑盒不含血漿、動物源成分以及其它不明確成分。

【用戶需要自行準備的試劑耗材】
? ? ? 0.4%苔盼藍溶液、生理鹽水、人淋巴細胞分離液、肝素鈉采血管/100ml 采血袋、PBS、75cm2懸浮培養瓶、175cm2 培養瓶、細胞培養袋、15mL/50mL/250mL 離心管、移液管、5mL 和 50mL無菌注射器等。

【樣本采集及運輸要求】

1. 外周血樣本采集應為肝素鈉采血管，臍帶血優先選擇 100ml 采血袋，采集過程應嚴格規范無菌。實際采血總量應大于 50ml，采集后血液與抗凝劑應及時混勻。
2. 樣本運輸條件為 18-25℃，24 小時處理樣本。
   

【PBMC 的分離和血漿制備（以 50ml 樣本 THERMO ST16 離心機為例）】

1. 將 50ml 血液樣本均分至2個 50ml離心管，3000rpm，10min，取上層血漿轉移至新的離心管，56℃，30min 滅活，4℃靜置 10min，3000rpm，10min，用吸管將上清液轉移至新的離心管中，- 20℃保存，使用前取出；
2. 剩下細胞加入生理鹽水至原體積，充分混合均勻，轉移至2個裝有15ml淋巴細胞分離液的50ml離心管中，室溫下1800rpm，30min；
3. 取出 PBMC 至新的 50ml 離心管；加入生理鹽水至45ml，1600rpm，8min；
4. 去上清，加入生理鹽水至 45ml，充分混勻，取樣計數；
5. 1400rpm，10min 收集 PBMC。
   

【培養基使用說明】
? ? ? 單獨取 40ml 培養基用于第一次接種；
? ? ? 第一瓶培養基｛CIK Cell Culture Medium (662071)｝加入一支 CIK-C (662074)，混勻，使用前恢復至室溫；
? ? ? 第二瓶培養基｛CIK Cell Culture Medium (662071)｝加入一支 CIK-D (662075)，混勻，使用前恢復至室溫；
? ? ? 現用現配。
【細胞接種】

1. 取 40ml 培養基（不加 CIK-C)加入 CIK-A (662072)和 5ml 自體血漿混勻待用。
2. 用混勻后的培養基重懸已經收集好的單個核細胞，細胞密度應大于 1.5×10⁶cell/ml；
3. 轉移混勻后的細胞懸液至懸浮細胞培養瓶，在緩慢平放于培養箱中培養。
   
4. 24 小時后加入一支 CIK-B (662073)，混勻。
   

【補液】

1. D3（72h），鏡下觀察有較多克隆團出現，即可補液，如有大量較大的克隆團，可適當打散（下同）， 轉移細胞至 T175 培養瓶中，補加 40ml 已配置培養基，5ml 自體血漿混勻；
2. D5，補加 100ml 已配置培養基，自體血漿 10ml，混勻；
3. D7，補加 200ml 已配置培養基和 10ml 自體血漿，混勻；
4. D9，往細胞培養袋補加 400ml 已配置培養基和 10ml 自體血漿，混勻，均分于 2 個細胞培養袋； 自體血漿如用完可不添加或用細胞營養添加物替代（下同）；
5. D11，往細胞培養袋補加 800ml 已配置培養基和 10ml 自體血漿，混勻，均分于 2 個細胞培養袋；
6. D13，往細胞培養袋補加所有剩余已配置培養基和 10ml 自體血漿，混勻，均分于 2 個細胞培袋；
   

【收獲】
? ? ? ?D15 收獲 CIK 細胞，可根據實驗情況，適當提前或延遲。